动物组织标本病理检测的取材与保存方法

 在科研动物实验中，经常涉及到动物组织的病理检测。然而，在做病理检测之前，往往容易忽视对组织标本的正确取材与保存。因此，根据病理检测方法不同，我整理了以下几点建议，以提高实验数据的有效性：

一、石蜡切片

石蜡切片主要用于HE染色、免疫组化、特殊染色等。在取材后，常使用10%中性福尔马林固定液（主要成分为甲醛）进行固定，以保护组织结构和细胞形态，同时起到抗原保护和防腐作用。然而，由于甲醛对组织的渗透力相对较弱，固定标本时需要注意以下几点：

1.1 及时固定：为防止组织自溶，固定液应尽早加入。通常要求标本离体后的30分钟内进行固定，以确保固定效果的最佳。

1.2 足够的固定液：固定液的体积应至少是组织体积的4-10倍，确保固定液能够充分渗透和覆盖组织样本。这样可以保证固定液与组织充分接触，提高固定效果。

1.3 切开大组织：对于较大的组织样本，应进行多切面切开，以便固定液能够更好地渗透和固定整个组织。这有助于避免组织内部未固定或固定不充分的问题。

1.4 特殊处理：对于特定的组织类型，根据研究需求，可能需要进行特殊处理。例如，肾脏通常要求进行矢状面切开；肠组织用于制作瑞士卷时，需要先剪开肠腔并卷成卷状，然后再进行固定；而含有骨质、钙化的组织还需要脱钙液进行脱钙。

1.5 合适的容器：固定后的组织样本会变得硬和定形，因此选择宽口、宽底的容器有助于方便将组织标本放入和取出，避免因容器口径过小而损坏固定后的组织。

1.6 适当的固定时间：固定时间通常在12小时到72小时之间较为合适。时间太短可能导致固定效果不佳，组织自溶的风险增加；而时间过长则可能影响后续的制片和染色效果，同时会降低抗原的活性。

1.7 储存条件：常温、阴凉、密封储存。

二、冰冻切片

冰冻切片常用于免疫荧光等分析。在需要使用冰冻切片时，组织标本的保存需要注意以下几点：

2.1 新鲜组织：冰冻切片要求使用新鲜的未经固定处理的组织标本。固定过程可能影响细胞内的酶活性和抗原性，因此冰冻切片通常使用新鲜组织以保留其天然活性；

2.2 及时制片：为防止组织自溶，应尽快制备冰冻切片。通常建议在组织标本离体后30分钟内完成制片过程。这样可以尽量保持组织的形态和结构。

2.3 避免沾水：水分会在冰冻切片过程中形成冰晶，影响切片质量。如果标本上有血液或液体残留，应使用吸水纸轻轻擦拭干净，而不是使用水冲洗。

2.4 超低温保存：如果无法及时制备冰冻切片，可以将组织标本放入-80℃冰箱进行冻存。这样可以保持组织的稳定性，避免其自溶。但也需要尽早处理，避免冷冻时间过程带来的不利影响。

2.5冰冻切片保存：一旦获得冰冻切片，应该及时将其保存在适当的条件下，如冷冻存储盒中，放置在-20℃或更低的温度下，以防止切片的退化和失去活性。

三、电镜切片

电子显微镜（电镜）在揭示生物结构与功能关系方面扮演着重要角色，其在生物医学研究领域的应用越来越广泛。在进行电镜切片的组织标本的取材和保存过程中，需要注意以下几点：

3.1 合适取材的部位：要尽可能准确的选择具有代表性的区域进行电镜切片制备，确保样本中包含所需的结构和细胞类型，通常需要结合光镜定位。

3.2 尽快固定：固定是防止组织结构和细胞形态变化的关键步骤。通常组织从活体取下后尽快（1-3分钟内）浸入预冷（4℃）固定液中。

3.3 避免机械损伤：在切割组织样本时，要使用锋利的刀片和轻巧的操作，以避免造成机械损伤。

3.4 低温保存和操作：低温（4℃）保存和操作可以降低酶的活性，防止组织自溶。

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